在藥物開發(fā)領域,靶點膜蛋白制備一直是科研工作者面臨的重大挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)表達系統(tǒng)難以實現(xiàn)功能性膜蛋白的高效制備,嚴重制約了藥物開發(fā)進程。
近日,珀羅汀生物采用無細胞蛋白表達系統(tǒng),成功制備出高活性人源SSTR2膜蛋白,經(jīng)表面等離子共振技術完成精準親和力檢測,實測其對相應抗體展現(xiàn)出超高親和力,KD值達0.649 nM!
SPR技術:分子互作檢測的"金標準"
表面等離子共振技術(SPR)作為無標記、實時監(jiān)測生物分子相互作用的權-威方法,能夠精準解析結合參數(shù)(ka、kd及KD值),提供分子互作的全面信息,被業(yè)界認為親和力檢測的可靠技術平臺。
本次實驗以Tidutamab類似物(Human IgG1)作配體,將其捕獲在Protein A芯片,濃度為1 μg/mL。將分析物SSTR2膜蛋白稀釋為5個濃度梯度(12.5 nM ~200 nM),分別進行檢測。SSTR2膜蛋白由珀羅汀生物無細胞蛋白表達平臺制備,產(chǎn)品名稱:Human SSTR2 Full-Length Protein,產(chǎn)品編號:PLDP0047-1;運行試劑:1*PBS,0.05% DDM,0.01% CHS,pH 7.4。

珀羅汀膜蛋白產(chǎn)品目錄

SSTR2膜蛋白SDS-PAGE

經(jīng)親和力檢測以及動力學曲線擬合,SSTR2膜蛋白與Tidutamab類似物的親和力常數(shù)為0.649 nM。
無細胞表達技術:膜蛋白研究的利器
無細胞蛋白表達(CFPS)是一種體外直接合成蛋白質的生物反應。珀羅汀無細胞膜蛋白表達技術可控性、開放性高,可以在體系中直接添加去垢劑或納米盤,為膜蛋白提供類膜環(huán)境,從而實現(xiàn)全長膜蛋白可溶性表達。珀羅汀無細胞系統(tǒng)在合成膜蛋白時,無需細胞內表達時復雜的靶向、插入、組裝過程,極大提高表達成功率。
無細胞+去垢劑表達體系特點:
規(guī)避毒性問題:無需維持細胞活力,可大量表達膜蛋白;
折疊環(huán)境可控:通過優(yōu)化去垢劑類型和濃度,為膜蛋白提供最適折疊環(huán)境。
無細胞+納米盤表達優(yōu)勢顯著:
模擬天然環(huán)境:在天然脂質雙分子層中完成膜蛋白折疊;
功能更完整:更接近生理狀態(tài)下的構象和活性。
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